el diagnóstico de enfermedades
infecciosas
Investigadores de todo el mundo usan los juegos de diagnóstico
desarrollados en los Laboratorios del OIEA en Seibersdorf
por
Peter F. Wright A 6
Qué aportan los animales domesticados al bienestar
de la humanidad?
Quizás lo primero que nos
venga a la mente sean los alimentos: carne, aves y
productos lácteos. Los animales también proporcionan
otros materiales como, por ejemplo, la lana y
el cuero. En algunas regiones del mundo, los animales
de tiro aún desempeñan un papel importante y vital
en el cultivo de la tierra y el transporte.
Sin embargo, varios factores pueden dañar la
estabilidad y la salud de las poblaciones animales.
Las condiciones ambientales desfavorables y la
alimentación deficiente limitan gravemente la productividad
animal, especialmente en el mundo en desarrollo.
Los animales debilitados son los más
vulnerables a las enfermedades.
La amenaza de las enfermedades infecciosas o
contagiosas constituye una preocupación mundial.
Esto lo atestigua el hecho de que la Organización de
las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación
(FAO), la Oficina Internacional de Epizootia
(OIE) y la Organización Mundial de la Salud (OMS)
compilan y publican conjuntamente un compendio
anual de las enfermedades que ocurren en sus estados
miembros. El Anuario de Sanidad Animal incluye
una lista de más de 140 enfermedades contagiosas
que repercuten en mayor o menor grado en las esferas
socioeconómica y zoosanitaria y en la salud
pública, y abarca las principales enfermedades del
ganado vacuno, ovino, caprino, caballar y porcino,
así como de las poblaciones avícola, cunícola, piscícola,
apícola, los moluscos y los crustáceos.
Enfermedades infecciosas
Las enfermedades infecciosas son provocadas por
los microorganismos. La mayoría de las enfermedades
de importancia para la veterinaria son causadas
por agentes virales y bacterianos y por helmintos.
Otras, en menor número, pero no menos importantes,
son causadas por mycoplasmatales, rickettsias,
protozoarios y otros agentes microbianos.
El Sr. Wright es Jefe de la Dependencia de Producción
Pecuaria de los Laboratorios del OIEA en Seibersdorf.
Las consecuencias de una enfermedad infecciosa
dependen de una serie de factores. Es obvio que las
enfermedades que ocasionan la muerte en masa de
animales adultos o jóvenes son muy graves. Algunas
enfermedades afectan seriamente la reproducción
natural, provocando la infecundidad o el aborto;
otras pueden causar grandes pérdidas en la productividad
desde el punto de vista de la calidad y la cantidad
de los alimentos, los materiales producidos o el
trabajo realizado. Las enfermedades zoonóticas amenazan
la salud del ser humano cuando el agente
infeccioso puede ser transmitido por los animales al
hombre. La importancia de una enfermedad determinada
dependerá de cómo se combinen los factores
antes mencionados.
Las enfermedades infecciosas pueden transmitirse
por diversas vías. En las secreciones corporales y
los desechos de animales infectados están presentes
algunos organismos en cantidades importantes, que
pueden propagarse por contacto con la población o
por contacto sexual. Algunos organismos pueden ser
transportados a través de grandes distancias por las
corrientes de aire o de agua antes de encontrar a un
animal que pueda ser infectado. Otros pueden ser
transmitidos por las madres a la progenie durante la
gestación. Incluso hay otros que pueden transmitirse
por picaduras de insectos. Algunos organismos
pueden también infectar a otros huéspedes como, por
ejemplo, los animales salvajes, que sirven de reservorios
para la transmisión potencial de las enfermedades
a los animales domesticados. Algunas enfermedades
son muy difíciles de detener y erradicar
según la vía de transmisión y los reservorios.
Diagnóstico definitivo
Muchas enfermedades infecciosas se presentan
con síntomas clínicos similares, lo que dificulta
mucho el diagnóstico preciso si no se pueden hacer
análisis de laboratorio. Para hacer un diagnóstico
definitivo de cualquier enfermedad infecciosa, es
preciso comprobar e identificar directamente el
agente causal encontrado en los tejidos o líquidos
infectados.
34 BOLETÍN DEL OIEA, 4/1992
CRÓNICAS
Las técnicas de laboratorio que se usan de ordinario
para aislar, cultivar e identificar los organismos
emplean gran densidad de mano de obra y son muy
costosas, a la vez que requieren un gran cúmulo de
conocimientos especializados y equipo. Aunque son
útiles para caracterizar y tipificar los microorganismos,
estas técnicas no son aplicables como procedimiento
de rutina para el diagnóstico en gran escala
en cualquier laboratorio.
Los últimos progresos alcanzados en la biotecnología,
como las técnicas de sondas de ácido nucleico,
sin duda facilitarán en el futuro la identificación
rápida y económica, pero en la actualidad aún se
consideran técnicas en fase experimental.
Diagnóstico serológico
Desde el punto de vista inmunológico, los agentes
infecciosos están compuestos por moléculas orgánicas
de gran volumen que el animal identifica como
extrañas o "no propias". Una característica del
desarrollo de una reacción inmunológica contra estas
moléculas orgánicas o antígenos es la producción de
anticuerpos contra la multitud de antígenos característicos
de un organismo determinado. Este repertorio
de anticuerpos representa la primera línea de
defensa de la inmunidad protectora.
Los anticuerpos tienen capacidad para enlazarse
con antígenos que sólo se encuentran en microorganismos
específicos. Como los anticuerpos sólo se
producen cuando se encuentran con un antígeno
extraño, la presencia de determinados anticuerpos es
una señal de exposición a cierto organismo, o de
infección. La detección de determinados anticuerpos
en la sangre y otros fluidos corporales es la base del
diagnóstico serológico.
Desde hace mucho más de medio siglo se vienen
usando técnicas serológicas para el diagnóstico de
presuntas enfermedades infecciosas. Se han concebido
numerosos tipos de pruebas, unas mucho más
complejas que otras. En el más general de los casos,
los análisis serológicos pueden dividirse en dos
grupos. Las pruebas serológicas clásicas dependen
de los fenómenos que presentan los anticuerpos y se
producen como consecuencia del enlace de un anticuerpo
con un antígeno específico. Estos fenómenos
incluyen la precipitación de los antígenos solubles, la
aglutinación de las bacterias o los glóbulos rojos, la
lisis de los glóbulos rojos o la neutralización de la
infectividad del virus. Hoy día aún se usan muchas
de estas técnicas clásicas para el diagnóstico, aunque
están siendo reemplazadas gradualmente por una
segunda generación de técnicas de análisis, conocidas
como análisis de enlace primario.
Los análisis de enlace primario no son exactamente
nuevos; de hecho existen desde hace más de
30 años. El enlace de un anticuerpo con un antígeno
al nivel molecular no es fácilmente discernible. Sin
embargo, cuando uno de los componentes de un sistema
de análisis se "marca" con una molécula que
produce una señal o un producto, entonces es posible
detectar y medir el enlace antígeno-anticuerpo. Los
primeros marcadores que se usaron fueron los
radisótopos y los colorantes fluorescentes que podían
enlazarse químicamente con anticuerpos o antígenos
purificados. Actualmente, algunos laboratorios todavía
usan el radioinmunoanálisis y el fluoroinmunoanálisis.
Por otra parte, está muy extendido el uso
del inmunoanálisis enzimático, porque los reactivos
marcados con enzimas son intrínsecamente más
estables y no están asociados a problemas sanitarios
ni de evacuación. Seleccionando substratos que
producen una sustancia coloreada después de la
degradación enzimática, podrá detectarse visualmente
o medirse fotométricamente la reacción
antígeno-anticuerpo que se produce durante el análisis.
El inmunoanálisis enzimático se le conoce
comúnmente como análisis ELISA. El término toma
su nombre de la sigla de ensayo inmunosorbente por
conjugados enzimáticos y fue acuñado hace más de
20 años, en la época en que empleó la técnica por
primera vez.
Inmunoanálisis enzimático
El diagnóstico serológico no es siempre tan seguro
como cabría pensar. Algunos antígenos presentes
en distintos organismos son tan semejantes desde el
punto de vista molecular que producen anticuerpos
que reaccionan y dan resultados positivos falsos en
cualquier análisis serológico. También se sabe que
con ciertos tipos de anticuerpos hay más probabilidades
de obtener resultados positivos falsos que con
otros. El uso extendido de vacunas contra ciertas
enfermedades también complica el diagnóstico serológico,
ya que los antígenos de las vacunas también
producirán anticuerpos que no podrán diferenciarse
fácilmente de los anticuerpos que produzca la
infección.
La mayoría de los principales laboratorios de
investigaciones veterinarias del mundo trabajan activamente
en el desarrollo y mejoramiento de reactivos
para su uso en las técnicas de diagnóstico
ELISA, en que es posible introducir mejoras, no así
en las técnicas serológicas clásicas. Los progresos
alcanzados en la biotecnología han tenido y seguirán
teniendo gran repercusión en las técnicas ELISA. El
uso de anticuerpos monoclonales muy específicos y
de antígenos recombinantes muy definidos ya ha permitido
mejorar el resultado de muchos diagnósticos
realizados con esta técnica.
Programas de sanidad pecuaria
Las técnicas serológicas son el soporte de los
programas de sanidad animal a escala mundial. Se
usan en los estudios seroepidemiológicos para determinar
la presencia o magnitud de una enfermedad
infecciosa concreta en una población animal como
asimismo en la vigilancia de los programas de lucha
contra las enfermedades que puedan entrañar el estudio
de los animales infectados y su sacrificio. Los
programas de vacunación también incluyen la vigilancia
serológica para determinar el número de
animales que han sido vacunados, y si están respondiendo
adecuadamente. Las técnicas serológicas se
utilizan para impedir la propagación de enfermeda-
BOLETIN DEL OIEA, 4/1992 35
CRÓNICAS
Laboratorios que
colaboran en el
desarrollo de las
técnicas ELISA
Quince laboratorios de nueve países colaboran
con el Laboratorio de Agricultura del OIEA en
Seibersdorf en el desarrollo de las técnicas
ELISA. Las enfermedades en que éstos se especializan
aparecen entre paréntesis.
• Reino Unido — Institute for Animal Health,
Pirbright (peste bovina, peste des petits rumiants,
fiebre catarral ovina y fiebre aftosa); Centre for
Tropical Veterinary Medicine, Edimburgo (tripanosomiasis);
Central Veterinary Laboratory,
Weybridge (brucelosis, rinotraqueítis infecciosa
bovina)
• Francia — Institut national de la recherche
agronomique, Nouzilly (brucelosis); Instituí d'elevage
et de médecine vétérinaire des Pays Tropicaux,
Maisons-Alfort (peste bovina, peste des
petits ruminants, pleuroneumonía contagiosa
bovina)
• Canadá — Animal Diseases Research Institute,
Nepean (brucelosis, fiebre catarral ovina,
enfermedad de Aujeszky)
• Australia — Regional Veterinary Laboratory,
Benalla (brucelosis, septicemia hemorrágica);
Long Pocket Laboratories, Indooroopilly
(babesiosis); Australian Animal Health Laboratory,
Geelong (fiebre catarral ovina, enfermedad de
Newcastle)
• Dinamarca — Instituto Nacional de Veterinaria,
Copenhague (leucosis enzoótica bovina)
• Brasil — Centro Panamericano de Fiebre
Aftosa, Río de Janeiro (fiebre aftosa)
• Estados Unidos de América — New York
State College of Veterinary Medicine, Ithaca
(rinotraqueítis infecciosa bovina); National Veterinary
Service Laboratory, Ames, Iowa (brucelosis,
fiebre catarral ovina)
• Kenya — Laboratorio Internacional de investigaciones
sobre enfermedades de los animales,
Nairobi (tripanosomiasis)
• Suecia — Instituto Nacional de Veterinaria,
Uppsala (enfermedad de Aujeszky, leucosis enzoótica
bovina)
des mediante el movimiento de animales infectados
dentro y fuera del país.
Como la información serológica es tan decisiva
para los programas de sanidad animal, es importante
que los resultados de los análisis sean lo más precisos
posible desde el punto de vista del diagnóstico. Para
que un análisis sea fiable, los reactivos biológicos
deben ser estables y la técnica, sólida. Para poderlo
aplicar en gran escala, el análisis debe ser económico
y rápido. Por eso el ELISA se ha convertido en el
centro de atención de las actividades de investigación
y desarrollo. Estas técnicas son muy apropiadas para
el diagnóstico de laboratorio en los países desarrollados
y en desarrollo.
Investigaciones de laboratorio y actividades
de apoyo
El diagnóstico de las enfermedades infecciosas es
una de las principales actividades de sanidad animal
del programa de la División Mixta FAO/OIEA de
Técnicas Nucleares en la Alimentación y la Agricultura.
En los Laboratorios del OIEA en Seibersdorf,
la Dependencia de Producción Pecuaria del Laboratorio
de Agricultura presta apoyo a este programa
mediante el desarrollo y la distribución de juegos de
ensayo para el diagnóstico (kits) creados para un fin
determinado.
Para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas,
se suministran juegos ELISA a los laboratorios
donde la serología forma parte de las actividades
de investigación de enfermedades infecciosas específicas.
(Además, en relación con otros problemas de
la sanidad y la productividad pecuarias, el Laboratorio
distribuye juegos de radioinmunoanálisis (RÍA)
para la medición de la hormona reproductora, la progesterona.
Esta hormona se emplea en el estudio y la
vigilancia de los ciclos reproductivos del ganado
vacuno, ovino, caprino, de los búfalos y de los
camélidos, como un medio de mejorar la reproducción.
En 1991 solamente, se suministraron más de
300 juegos RÍA (aproximadamente 125 000 mediciones
analíticas, a unos 60 laboratorios de contrapartida
de Africa, Asia y América Latina.)
Durante los últimos seis años, se ha dado prioridad
a las enfermedades infecciosas del ganado. En
un futuro próximo, también se prevé crear juegos
ELISA para determinadas enfermedades avícolas y
porcinas.
La Dependencia de Producción Pecuaria del
OIEA no realiza las investigaciones iniciales para la
creación de los reactivos de diagnóstico mediante las
técnicas ELISA, sino que adapta los reactivos y las
técnicas ELISA existentes para darles un formato de
juego (kit) apropiado para los laboratorios de contrapartida
de los países en desarrollo. Para lograr esto,
la Dependencia necesita mucho la colaboración de
los principales laboratorios de investigaciones veterinarias
del mundo. En la actualidad, hay 15 laboratorios
que colaboran activamente en el desarrollo de
juegos ELISA y en el suministro de reactivos. (Véase
el recuadro.)
La normalización y el control de calidad son los
elementos fundamentales para la creación de estos
juegos, ya que son esenciales para lograr la uniformidad
del diagnóstico en los laboratorios y entre
éstos. Se han elaborado directrices pormenorizadas
en que se describen las necesidades de equipo, la
preparación y el almacenamiento de los reactivos,
los procedimientos de análisis, las actividades de
control de calidad, los criterios de aceptación de los
datos, la interpretación de los resultados y la solución
de los problemas.
Todos los prototipos de juegos ELISA tienen que
ser validados desde el punto de vista del diagnóstico
antes de ser considerados listos para su distribución
a los laboratorios de contrapartida. La validación se
logra comparando el comportamiento del juego con
la mejor técnica serológica que existe actualmente
para el análisis de determinados conjuntos de
muestras. Para obtener una evaluación imparcial y
crítica del comportamiento del juego, se hace la
validación en colaboración con laboratorios
especializados.
Tan pronto un juego ELISA es normalizado y
validado, se considera listo para su producción y
distribución a los laboratorios de contrapartida. La
transferencia de la tecnología de juegos de ensayo
requiere la capacitación del personal del laboratorio
receptor en el uso de éstos y del instrumental, así
36 BOLETÍN DEL OIEA, 4/1992
CRÓNICAS
Argelia
Marruecos
Malí
Mauritania
Senegal —
Gambia
Sierra Leona
Burkina Faso
Cote d'lvoire
Ghana
Niger Chad
Egipto
Sudan
Etiopía
Investigadores de
sanidad pecuaria de
unos 75 laboratorios de
América Latina, Africa,
Asia y el Pacifico usan
los juegos de ensayo
para el diagnóstico
desarrollados por los
Laboratorios del OIEA
en Seibersdorf, Austria.
República
Centroafricana
Somalia
'ganda
enya
Tanzania
Rwanda
urundi
•
•
•
-
T
•
1
Brucelosis
Babesiosis
Fiebre aftosa
Leucosis bovina
Peste bovina
Tripanosomiasis
Rinotraqueítis
infecciosa bovina
Zimbabwe
México
Cuba
República Dominicana
Guadalupe
Venezuela
Colombia
Brasil
Paraguay
Uruguay
Argentina
Omán
Yemen 1¡íj¡^
Sri Lanka
Indonesia £***
BOLETÍN DEL OIEA, 4/1992 37
CRÓNICAS
Animales "lecheros"
típicos en el Perú.
como en la interpretación de los datos de control de
calidad y análisis. La función principal de la Dependencia
a este respecto es prestar asistencia técnica a
la División Mixta FAO/OIEA en la capacitación.
A menudo, los laboratorios de contrapartida
requerirán apoyo técnico para resolver los problemas
locales que afecten el comportamiento del juego de
ensayo, como por ejemplo, el mal funcionamiento
del equipo, el deterioro del reactivo, o la mala calidad
del agua. Probablemente la calidad del agua sea
el elemento más importante, ya que todas las técnicas
serológicas necesitan soluciones tampón acuosas
para la preparación de los reactivos y los procedimientos
de análisis. La Dependencia elabora sistemas
de identificación de dificultades para ayudar a
los científicos de contrapartida a resolver los problemas
locales por sí mismos. También brinda un servicio
de reparación de equipo en colaboración con la
Dependencia de Instrumentos de los Laboratorios del
OIEA en Seibersdorf.
La creación de sistemas de control de calidad
externos es la última de las funciones de apoyo que
cumplen estos juegos. Las actividades de rutina se
complementan con análisis periódicos de grupos de
muestras para comprobación externa que se verifican
"a ciegas" en laboratorios de contrapartida (es
decir, sin conocer previamente la reactividad de la
muestra). Esto garantiza la verificación imparcial del
análisis y del trabajo técnico realizado. El éxito en el
análisis de este tipo de grupos de muestras fomenta
la confianza en los homólogos y sirve de base para
la aceptación internacional de los datos.
Se han creado juegos ELISA para el análisis de
los anticuerpos de las principales enfermedades del
ganado: peste bovina, brucelosis, babesiosis, leucosis
bovina y rinotraqueítis bovina infecciosa. Se han
concebido otros para los antígenos de la fiebre añosa,
la tripanosomiasis y la septicemia hemorrágica.
Estos últimos juegos se emplean para la detección de
antígenos y no de anticuerpos, y se usan para el diagnóstico
definitivo. A punto de ser terminados están
los juegos ELISA para la detección de los anticuerpos
de la fiebre catarral ovina y la pleuroneumonía
contagiosa bovina. En un futuro próximo, se comenzarán
a desarrollar juegos para la enfermedad de
Aujeszky (cerdos) y la enfermedad de Newcastle
(aves).
En el transcurso de 1992, se enviaron más de
100 juegos (aproximadamente 0,6 millones de dosis
de análisis) a unos 75 laboratorios de contrapartida
de todo el mundo. (Véanse los mapas.)
Compromiso internacional
Como las enfermedades infecciosas constituyen
una preocupación mundial, se han establecido vínculos
de colaboración con la FAO, la OMS y la OIE
para la normalización internacional de las técnicas y
los reactivos ELISA y su aplicación en los programas
de lucha, erradicación y vigilancia a escala
mundial.
En 1992, la Dependencia de Producción Pecuaria
de los Laboratorios del OIEA en Seibersdorf fue designada
oficialmente Centro FAO/OIEA de técnicas
moleculares y ELISA para el diagnóstico de enfermedades
de los animales y Centro de Colaboración
con la OIE para los Métodos de Diagnóstico Inmunoenzimático
y Molecular.
Estas designaciones entrañan un compromiso con
las actividades de normalización internacional que
benefician tanto a los países industrializados como a
los países en desarrollo.
38 BOLETÍN DEL OIEA, 4/1992
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